利用計算機進行圖象處理,從而得到細胞或組織內(nèi)部微細結構的熒光圖象,以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細胞形態(tài)的變化。
下面讓我們來了解一下激光共聚焦顯微鏡的組成結構吧
激光共聚焦掃描顯微鏡(Confocal laser scanning microscope,CLSM)用激光作掃描光源,逐點、逐行、逐面快速掃描成像,掃描的激光與熒光收集共用一個物鏡,物鏡的焦點即掃描激光的聚焦點,也是瞬時成像的物點。
系統(tǒng)經(jīng)一次調(diào)焦,掃描限制在樣品的一個平面內(nèi)。調(diào)焦深度不一樣時,就可以獲得樣品不同深度層次的圖像,這些圖像信息都儲于計算機內(nèi),通過計算機分析和模擬,就能顯示細胞樣品的立體結構。
在結構 配置上,激光掃描共聚焦顯微鏡除了包括普通光學顯微鏡的基本構造外,還包括激光光源、掃描裝置、檢測器、計算機系統(tǒng) (包括數(shù)據(jù)采集、處理、轉換、應用軟件)、圖像輸出設備、光學裝置和共聚焦系統(tǒng)等部分。
由于該儀器具有高分辨率、高靈敏度、"光學切片"(Optical sectioning)、三維重建、動態(tài)分析等優(yōu)點,因而為基礎醫(yī)學與臨床醫(yī)學的研究提供了有效手段。此外,CLSM 對熒光樣品的觀察具有明顯的優(yōu)勢,只要能用熒光探針進行標記的樣品就可用其觀察。
激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細胞形態(tài),也可以用于細胞內(nèi)生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計以及細胞形態(tài)的測量, 配合焦點穩(wěn)定系統(tǒng)可以實現(xiàn)長時間活細胞動態(tài)觀察。
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